免疫组化服务的相关问题解析

发布日期： 2022-10-23

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免疫组化服务是通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究。组织或细胞中凡是能作为抗原或半抗原，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。

1、出现非特异性背景染色怎么办？

(1)冲洗不充分解决：每步冲洗3×5

(2)组织中含过氧化物酶未阻断解决：可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长

(3)组织中含内源性生物素解决：正常非免疫动物血清再封闭

(4)血清蛋白封闭不充分解决：延长血清蛋白封闭时间

2、脱片产生的原因有哪些？

（1）组织切的不好，切的不均匀。

（2）时间短，温度不够。

（3）操作不规范，有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩，用卫生纸从边缘上慢慢吸水。

（4）抗原修复的时候高压时间过长了。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。

（5）使用PBS的时候尽量用泡的，不要冲。

3、染色阴性怎么办？

（1）操作步骤错误，重新试验，设立阳性对照

（2）组织中无抗原，设立阳性对照片，以验证实验结果

（3）一抗与二抗种属连接错误，仔细确定一抗与二抗种属无误

4、苏木素复染后氨水返蓝怎么做?

返蓝可以用碱性溶液（PBS/Na2HPO4/淡氨水）或45度温水.冷水蓝化均可。一般蓝化5~10min。

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