使用方法

 

　　1.融化蛋白标准品，取适量蛋白标准品稀释至终浓度为0.5mg/mL。蛋白样品使用什么溶液溶解，标准品也应用什么溶液稀释，但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20μL加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20μL，相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL。

 

　　2.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5mLBCA试剂A加100μLBCA试剂B，混匀，配制成5.1mlBCA工作液。BCA工作液室温24h内稳定。

 

　　3.加适当体积样品到96孔板的样品孔中，也加稀释液到20μL。

 

　　4.各孔加入200μLBCA工作液，37℃放置20~30min。也可以室温放置2h，或60℃放置30min。

 

　　5.测定A562吸光值，540~595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。

 

　　注意事项

 

　　1.蛋白标准品配制后可立即使用，也可以-20℃长期保存。

 

　　2.BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育或适当延长孵育时间以获得更好检测效果。

 

　　3.因为延长孵育时间会引起吸光值的变化，所以在用紫外分光光度计检测时，应尽可能加快检测速度，以免先检后检产生系统误差。

 

　　4.标准蛋白液的加量应当准确，如果加量不准确，会导致制作出来的标准曲线出现偏差，影响待测样品的浓度计算，所以一方面需要用梯度稀释的方法来配置标准蛋白液，另一方面应使用精确度高的移液枪。